利用基因编码荧光蛋白的时间分辨荧光

发布日期: 2018-01-08   作者:  浏览次数: 120

     荧光蛋白与感应蛋白融合制备新型生物探针在生命科学领域具有重要的意义和巨大的应用价值,为国际上的热点研究领域之一。近几年来,众多相关的文章发表在ScienceNatureCell的主刊和子刊上。但是因为荧光蛋白本身特性的限制,该类探针都必须采用双激发峰荧光蛋白得荧光强度比率来实现定量测量,并且无法克服pH影响。从该类探针荧光信号的变化难以直接区分是由于观测物浓度还是pH变化引起的。我们采用时间分辨荧光,利用不同寿命所占比率随检测物浓度变化而变化的特性,提出了一种只采用一个激发波长和一个探测波长的新型比率测量方法。它具有比荧光寿命更大的灵敏度,不受pH影响,并且适用于细胞成像,与传统的方法相比具有巨大的优势 

 

 

                             图 1 与NADH结合前(a,c)后(b,dPeredox蛋白的时间分辨荧光衰减曲线。

                                   (eNADH探测中荧光蛋白结构变化和荧光寿命比率示意图。

  

   

   图 2Peredox蛋白时间分辨荧光各个组分随NADH浓度变化图。

  

 

                          图 3细胞中采用Peredox蛋白的平均荧光寿命和荧光寿命比率成像效果对比图